
您的位置:網(wǎng)站首頁 > 技術文章 > 測 DON 別只盯游離態(tài),結合態(tài)毒素與對應同位素內(nèi)標不少實驗室尚未配齊 一、嘔吐毒素檢測的“經(jīng)典項目"和“隱藏項目"
做真菌毒素檢測的實驗室對脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)已經(jīng)相當熟悉。它是小麥、玉米等谷物中污染面zui廣的鐮刀菌毒素之一,GB 2761規(guī)定了嚴格的xian量要求,是糧油企業(yè)和飼料廠日常檢測的高頻項目。檢測方法也成熟,免疫親和柱加HPLC或LC-MS/MS就能穩(wěn)定定量。
但在DON的檢測體系中,有一個“隱藏款"正在獲得越來越多的關注——脫氧雪腐鐮刀菌烯醇-3-葡萄糖苷,簡稱DON-3-Glc。它不算一個新化合物,卻是一個容易被低估的檢測盲區(qū)。
二、DON-3-Glc是什么?為什么值得測?
DON-3-Glc是植物自身代謝產(chǎn)生的一種修飾形式。當小麥、玉米等作物受到產(chǎn)DON真菌侵染后,植物會啟動解毒機制,把一部分游離DON與葡萄糖結合,轉化為DON-3-Glc。這個過程本質上相當于植物把毒素“鎖"了起來,但問題在于,這個“鎖"進入人體或動物消化道后可能被解開——腸道菌群產(chǎn)生的糖苷酶可以將DON-3-Glc水解,重新釋放出游離DON。
這意味著如果只測游離DON,會低估樣品中實際的總DON暴露量。有研究顯示,在某些小麥樣品中,DON-3-Glc的含量可達到游離DON的10%到30%。對于嬰幼兒食品、全麥制品、出口谷物等高關注場景,客戶和監(jiān)管機構對總DON的評估需求正在提升,DON-3-Glc的檢測需求隨之增長。它屬于“修飾型真菌毒素",目前雖未普遍列入強制xian量,但作為風險評估和合規(guī)檢測的延伸項目,正在進入越來越多實驗室的方法體系中。
三、檢測DON-3-Glc,同位素內(nèi)標為什么重要?
DON-3-Glc的檢測通常采用LC-MS/MS法。和所有質譜定量一樣,最大的挑戰(zhàn)來自基質效應。谷物樣品的提取液中含有多糖、蛋白、色素等復雜成分,在離子源中與目標物共流出時,可能顯著增強或抑制DON-3-Glc的離子化效率,導致定量偏差。
要校正這種偏差,同位素內(nèi)標是理想的選擇。內(nèi)標的目標物化學結構wan全一致,色譜行為幾乎相同,wei一區(qū)別是分子量多了幾個道爾頓,可以被質譜清晰區(qū)分。內(nèi)標和目標物經(jīng)歷wan全相同的提取、凈化、離子化過程,兩者的信號比值不受基質效應影響,定量結果更接近真實值。
普瑞邦U-[13C21]-脫氧雪腐鐮刀菌烯醇-3-葡萄糖苷內(nèi)標標準品,就是將DON-3-Glc分子中的全部21個碳原子替換為13C。全碳標記的質量偏移是21道爾頓,與天然DON-3-Glc在質譜上wan全分離,抗干擾能力強。全碳標記還意味著同位素豐度高,內(nèi)標中殘留的天然目標物極低,不會在低濃度樣品中引入額外的“本底",這是低污染水平谷物樣品檢測時尤其需要關注的一點。
四、10 µg/mL乙腈溶液的規(guī)格選擇
這款內(nèi)標以10 µg/mL的濃度溶于乙腈中供應。這個濃度對于LC-MS/MS方法的內(nèi)標添加來說處于比較友好的工作區(qū)間。使用時不需從極低濃度開始逐步稀釋,按方法要求直接取適量加入樣品或標準溶液中即可。乙腈溶劑與反相色譜流動相兼容性好,大體積進樣時不易產(chǎn)生溶劑效應,開封后按實驗室規(guī)范分裝保存、避免反復凍融和溶劑揮發(fā),可以維持較長時間的濃度穩(wěn)定。
五、哪些實驗室需要關注這款內(nèi)標?
做DON檢測且客戶開始要求DON-3-Glc數(shù)據(jù)的出口型企業(yè)和第三方檢測機構,是當前最直接的適用群體。建立LC-MS/MS方法時,同位素內(nèi)標是保證數(shù)據(jù)可靠性的關鍵配套。科研和風險評估機構在開展谷物中修飾型真菌毒素的膳食暴露研究時,全碳標記內(nèi)標提供的量值溯源性是數(shù)據(jù)可信度的基礎支撐。
只測DON不測DON-3-Glc,可能低估了谷物中的真實毒素負擔。當檢測范圍從游離態(tài)延伸到結合態(tài),方法體系中需要配套同位素內(nèi)標來守住定量的準確性。普瑞邦U-[13C21]-脫氧雪腐鐮刀菌烯醇-3-葡萄糖苷內(nèi)標標準品,為實驗室開展DON-3-Glc檢測提供了一個量值清晰、使用方便的內(nèi)標選項。
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