AFTB1 （Aflatoxins B1）ELISA檢測試劑盒

產(chǎn)品名稱：AFTB1試劑盒

產(chǎn)品概述：AFT是曲霉菌屬的黃曲霉和寄生曲霉的二次代謝產(chǎn)物。這些霉菌來源于潮濕的熱帶地區(qū)，大面積種植的糧食作物會被其污染。AFT是自然界zui危險的致癌物質(zhì)。

AFT中毒性zui強(qiáng)的是AFTB1，其幾乎一直和AFTB2、G1 和 G2共存。他們主要存在于玉米、花生、巴西堅果、棉籽和開心果中。美國食品和藥品監(jiān)督管理局（FDA）已對食品和飼料中的AFTzui高允許水平作了規(guī)定，因此，準(zhǔn)確測定AFT含量對于食品和飼料的品質(zhì)監(jiān)控具有重要意義。

適用范圍

黃曲霉B1試劑盒可定性、定量檢測玉米、大米、麥類、豆類、花生、飼料、食用油等樣本中的AFTB1。

檢測限：0.1ppb

試驗原理

采用競爭ELISA，在微孔板上預(yù)包被AFTB1抗原，加入樣本（或AFTB1標(biāo)準(zhǔn)品溶液）及辣根過氧化物酶標(biāo)記的AFTB1抗體。樣本或標(biāo)準(zhǔn)品溶液中的AFTB1與預(yù)包被在板孔上的AFTB1抗原競爭結(jié)合辣根過氧化物酶標(biāo)記的AFTB1抗體。與樣本或標(biāo)準(zhǔn)品溶液中的AFTB1結(jié)合的酶標(biāo)抗體在洗滌時被除去。再加入TMB顯色液，讀取吸光值。樣本的吸光值與其所含殘留物AFTB1抗原的含量成負(fù)相關(guān)。對照標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可得出相應(yīng)殘留物AFTB1的含量。

試劑配制

1、樣品稀釋液：用去離子水將濃縮樣品稀釋液按1:9體積比進(jìn)行稀釋（1份濃縮樣品稀釋液+9份去離子水）。

2、洗滌工作液：用去離子水將濃縮洗滌液按1:9體積比進(jìn)行稀釋。

3、50％甲醇/水：取無水甲醇，用去離子水以1：1倍稀釋（1份無水甲醇＋1份水）

操作步驟

1. 將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

2. 取出需要數(shù)量的微孔板，將不用的微孔板放進(jìn)原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封，保存于2～8℃。不要冷凍。

3. 洗滌工作液在使用前也需回溫。

4. 將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

5. 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50ml到對應(yīng)的微孔中，加入酶標(biāo)物50ml/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置室溫避光環(huán)境中反應(yīng)15min。

6. 小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌工作液300ml/孔，充分洗滌5次，每次間隔30s，用吸水紙拍干。

7. 加入顯色液100ml/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置室溫避光環(huán)境反應(yīng)15min。

8. 加入終止液50ml/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處測定每孔OD值。

注意事項

1. 室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫（20～25℃）會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。

2. 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

3. 每加一種試劑前需將其搖勻。

4. 反應(yīng)終止液為2M鹽酸，避免接觸皮膚。

5. 不要使用過了有效日期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。

6. 儲存條件：

保存試劑盒于2～8℃，不要冷凍，將不用的酶標(biāo)板微孔板放進(jìn)自封袋重新密封。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。

7. 試劑變質(zhì)的跡象：

發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質(zhì)。

8. 在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時間為20～30min即可。若顏色較淺，可延長反應(yīng)時間到35min（或更長），但不得超過40min。反之，則減短反應(yīng)時間。

9. 該試劑盒*反應(yīng)溫度為25℃，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

試劑盒組成

1. 96孔酶標(biāo)板……………………………………   1塊

2. 標(biāo)準(zhǔn)液（1ml/瓶）  ……………………………  6瓶

  0ppb, 0.1ppb, 0.3ppb, 0.9ppb, 2.7ppb, 8.1ppb

3. 酶標(biāo)物 1瓶  ……………………………………… 6ml

4. 底物液1瓶    ……………………………………  12ml

5. 終止液1瓶    ……………………………………   6ml

6. 濃縮洗滌液 （10×） ……………………………   40ml

7. 樣品稀釋液（10×）  ……………………………… 20ml

8. 操作說明書一份                                            

注意：標(biāo)準(zhǔn)品含有低濃度AFT、終止液含2M HCl，需小心取用。勿在有效期外使用本試劑盒。

貯藏條件及保存期

       貯藏條件：保存試劑盒于2～8℃。

保存期：黃曲霉B1試劑盒有效期為12個月。

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